相差顯微鏡觀測熟視網膜神經節細胞三維培養

提供給你一種成熟視網膜神經節細胞三維培養方法：

1大鼠培養網膜的獲得 10周齡的Wistar系大鼠，乙醚麻醉后摘出完整眼球，在顯微鏡下依次除去角膜，鞏膜和脈絡膜，再除去晶體和玻璃體，分離網膜。上述操作要求動作輕巧快速準確，分離網膜時，要把玻璃體完全清除干凈。切除周邊網膜，取距視盤1至1.5mm處網膜，切成邊長500μm的方形網膜片16片,顯微鏡。上述操作要求在培養液內完成，無菌操作，避免細菌污染。

.2 網膜片的培養 在0℃環境下，將配置好的膠原溶液滴于用10 mg•L-1多聚賴氨酸包被的培養孔中央，形成直徑15mm的膠原溶液層。膠原溶液由以下成分組成:①用CH3COOH溶液稀釋的0.3%Ⅰ型膠原(從大鼠尾巴提取)pH3.0;②10倍濃度的MEM培養液; ③每100ml含NaHCO3 2.20g和Hepes 4.77g的0.05N NaOH。①: ②: ③=8:1:1。將網膜片的神經纖維層向下浸入膠原溶液層中，每孔4片。37℃水浴5min。液態膠原凝固成盤狀凝膠，網膜片固定在其中（附圖）。培養孔中加入培養液，置于5%CO2、37℃恒溫箱中。隔日換培養液。培養液成分如下: 不含血清的MEM，2.7 g•L-1的葡萄糖，5 mg•L-1的胰島素，16.1 mg•L-1的肉毒堿，792 mg•L-1的小牛血清白蛋白,金相顯微鏡價格，5.2μg•L-1的Na2SeO3，3.7g•L-1的NaHCO3，3.6 g•L-1的Hepes。用相差顯微鏡觀察生長情況。