顯微鏡下觀察細胞吹打更容易成功的經驗
方法一: 1.用力不能太猛,要均勻吹打; 2.按順序從上到下,從右到左,每個地方都吹到。 3.盡量不要吹起泡沫,有少量問題也不大。 4.吹打的次數有時候與胰酶有關系。我們一般是冷胰酶消化0.5-1min(A549,2BS,HepG2都試過了),15-20次也夠了。 過度吹打會損害細胞,會影響培養基的pH值...,但是,如果不充分吹打,消化后細胞還是有好多貼在壁上 在75ml培養瓶的不同部分吹打,總共15次,然后在解剖顯微鏡下觀察,細胞99%吹打下來了,狀態也不錯。
方法二: 用預熱胰酶加入1ml,然后倒掉0.5ml左右,再等待2min左右就可以了,大約吹打15次就OK 其實帖壁生長細胞消化傳代并不是借助吹打的力量才使細胞離壁,關鍵是消化。 消化要到位,然后棄掉胰酶,加培養基,搖晃培養瓶,使細胞借助培養液打擊的力量脫落。 然后用槍吹幾次培養液,把仍沒有成單個的細胞吹成單個。 我覺得這樣對細胞損傷很小。
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