掌握熒光顯微鏡性質(zhì)根據(jù)ELISA的原理,對細(xì)胞復(fù)染的技巧 一般要根據(jù)熒光顯微鏡的原理和性質(zhì)來確認(rèn)使用的激發(fā)塊類型 1)熒光原理是用短波長的光去激發(fā)標(biāo)本,標(biāo)本產(chǎn)生長波長的熒光。在光譜上, 461nm是藍(lán)色光,530nm是綠色光 345nm是近紫外光(肉眼看不見)。
2)DAPI染料染細(xì)胞核,應(yīng)使用激發(fā)波長359nm的紫外光去激發(fā),選擇吸收波長461nm的濾色鏡來觀測藍(lán)色熒光。
3)染細(xì)胞質(zhì)的綠色染料就該用激發(fā)波長345nm的近紫外光去激發(fā),選擇吸收波長530nm的濾色鏡去觀察綠色熒光。
4)需明白你所使用的熒光激發(fā)塊,一般情況下熒光顯微鏡激發(fā)塊有窄帶和寬帶兩種。 (1)如你所用的近紫外激發(fā)塊是寬帶的,那么在熒光顯微鏡下應(yīng)可以同時看到藍(lán)色的細(xì)胞核和綠色的細(xì)胞質(zhì); 如只看到綠色細(xì)胞質(zhì),就很可能是你的激發(fā)塊選擇錯誤,你也許選擇了藍(lán)光激發(fā),所以只能看見綠色的細(xì)胞質(zhì)。 (2)如你所使用的近紫外激發(fā)塊是窄帶的,無論怎樣你將只能看到藍(lán)色或綠色其中一種,看主要看選什么波長激發(fā)。
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